• Mashgulot uslubi: «Bumerang» texnologiyasi. «BBB» (Bilaman, Bildim,Bilishni hohlayman ) usuli. Mashg‘ulot maqsadi
  • Ishning nazariy qismi
    		•

    Farmatsevtik biotexnologiya




    Download 4,16 Mb.
    Pdf ko'rish
    bet86/134
    Sana07.06.2024
    Hajmi4,16 Mb.
    #261246
    1   ...   82   83   84   85   86   87   88   89   ...   134
    Bog'liq
    biotex

     
    MASHG‘ULOT № 11 
    MAVZU: Transgen hayvonlar. Transgen hayvonlar yaratish texnologiyasi
    Mashg'ulot shakli:
    «Sanoat farmatsiyasi» yo‘nalishi talabalari uchun amaliy mashg‘ulot. 
    Mashg'ulot uslubi:
    «Bumerang» texnologiyasi. «BBB» (Bilaman, Bildim,Bilishni hohlayman ) 
    usuli. 
    Mashg‘ulot maqsadi:
    gen muhandisligi, rDNK tehnologiya asosida olinadigan transgen 
    hayvonlar, transgen hayvonlar olish usullari
     
    Mavzuning ahamiyati:
    ushbu mavzuda farmatsevtika va gen muhandisligi hamda 
    biotehnologiyaning uzviy bog'liqligi ochib beriladi
     
    Ishning nazariy qismi
    Transgen hayvonlarni olishni 2 hil usuli bor: 

    urug'lantirilgan tuhum hujayra(zigota)ga begona organizm DNKsini mikroin'ektsiya 
    qilish; 
    (bu usul transgen sichqon olish uchun ishlab chiqilgan, keyinchalik esa transgen sigir, qo'y, 
    quyon, 
    echki 
    kabi 
    hayvonlarni 
    olish 
    uchun 
    ham 
    qo'llanila 
    boshlandi) 
     
    Mikroin'ektsiya usulida transgen hayvon olish bosqichlari: 
    1- in'ektsiya qilish uchun zigota olish; 
    2- mikroin'ektsiya; 
    3- embrionlarni retsipient organizmga ko'chirib o'tkazish; 
    4- mikroin'ektsiya qilingan embrionlardan tug'ilgan hayvonlar: ularning faqat bir qismi 
    transgen; 
    5- hayvon genomiga begona gen kiritilganligini tasdiqlash uchun molekulyar-genetik tahlil 
    o'tkazish;
    6- transgen gameta
    14
    lari mavjud hayvonlarni saralash. Transgen gomozigotalarni selektsiya 
    qilish ya'ni transgen hayvonlarni o'zaro chatishtirish;
    7- transgen hayvonlar podasi; 
    8- transgen hayvon sutidan dorivor oqsilni ajralishi 
    Mikroin'ektsiya usulida transgen hayvon olishda dastlab genetik konstruktsiya yaratiladi. 
    Masalan, tadqiqotchi sut bezlari epiteliy hujayralarida begona genlar ekspressiyalanuvchi 
    transgen hayvon yaratmoqchi. Buning uchun β-kazein geni promotori va begona organizm 
    DNKsi yordamida genetik konstruktsiya yaratiladi. Yaratilgan konstruktsiya faqat sut bezlari 
    hujayralarida ekspressiyalanishi va faqat laktatsiya davrida «ishlashi» lozim. Shuningdek 
    14
    Ko'p hujayrali organizmlardagi reproduktiv hujayra. Gametalar gaploid bo'lib, ikkita gameta qo'shilganda diploid 
    zigota hosil bo'ladi. Zigotadan esa ko'p hujayrali organizm etiladi
    .

    98 
    konstruktsiyadagi genlar transgen organizmga nojo'ya ta'sir ko'rsatmasligi kerak. Tadqiqotchi 
    tomonidan yaratilishi rejalashtirilayotgan transgen hayvonda avval bo'lmagan hossalarning 
    (misol uchun, kattaligi, kichikligi, go'shtdorligi, tez nasl bera olishi va h.k.) vujudga kelishi ko'p 
    jihatdan genetik konstruktsiyaga bog'liq. Konstruktsiyani yaratishda 
    Escherichia coli
    bakteriyasi plazmidasidan foydalaniladi. Plazmida restriktaza fermentlari bilan kesiladi. 
    Plazmidani kesilgan joyiga begona organizmdan olingan DNK fragmenti ulanadi. Plazmidaga 
    begona DNKni ulash uchun ligaza fermentlaridan foydalaniladi. Hosil bo'lgan rekombinant 
    DNK 
    Escherichia coli
    bakteriyasiga kiritiladi va klonlanadi. Klonlar bakteriyadan ajratiladi va 
    kesilib chiziqli shaklga ot'kaziladi. Chunki plazmidaga nisbatan chiziqli shakldagi DNK embrion 
    genomiga oson o'rnashadi. 
    Tayyor bo'lgan chiziqli shakldagi DNK (genetik konstruktsiya) zigotaga in'ektsiya qilinadi. 
    In'ektsiyadan keyin zigota odatdagidan ancha kattalashadi. So'ngra zigota urg'ochi retspientga 
    implantatsiya qilinadi. Ammo urg'ochi retspientdan tug'ilgan hayvonlarning hammasi ham 
    transgen bo'lavermaydi. Transgen bo'lganlarida esa begona gen organizmning barcha 
    to'qimalarida bir hil tarqalgan bo'lmaydi. Shuning uchun transgen hayvon olishda molekulyar-
    genetik tahlilning ahamiyati katta.
    Embrionlarni transfektsiya qilish usullari: (a) - quyon zigotasiga genetik 
    konstruktsiyani mikroin'ektsiya qilish, (b) – embrional o'zak hujayralarini norka 
    (qorakuzan) blastotsistasiga
    15
    kiritish. Embrionlarning diametri qobig'i bilan birga 140-
    150 mkm. Rasmni chap tomonida mikroso'rg'ichlarni ko'rish mumkin. Ular yuqoridagi 
    protseduralarni bajarishda embrionni bir holatda ushlab turadi.
    Tahlilni o'tkazishda 3 ta savolga javob topish kerak: 
    - birinchidan, yaratilgan genetik konstruktsiya embrion genomiga o'rnashdimi? 
    - ikkinchidan, retsipient-organizm jinsiy hujayralariga genetik konstruktsiyadagi genlar 
    kirganmi?
    - uchinchidan, tug'ilgan hayvonda begona gen ekspressiyalandimi (namoyon bo'ldimi)?
    Urg'ochi retsipient-organizmdan erkak tug'ilgani ayni muddao. Chunki tug'ilgan erkak 
    hayvon tuhum hujayralarida begona gen ekspressiyalangan bo'lsa, uni boshqa urg'ochilar bilan 
    chatishtirish mumkin. Shunda begona gen keyingi avlodlarga o'tib ketaveradi.
    Erkak hayvonni urg'ochilar bilan chatishtirishda sun'iy urug'lantirish usulidan ham 
    foydalanish mumkin. Ulardan tug'ilgan hayvonlar F
    1 
    avlod bo'ladi. Transgen hayvonlar liniyasi 
    vujudga kelishi uchun F
    1 
    avloddagi hayvonlarni o'zaro chatishtirib, F
    2
    avlod olish lozim.
    Tadqiqotning so'nggi bosqichida F
    2
    avlod vakillarining gomozigotalari tahlil qilinadi. Bu 
    bosqichda urg'ochi retsipient-organizmga kiritilgan genetik konstruktsiyadagi genlar F
    2
    avlod 
    15
    Blastotsista – sut emizuvchilar, shu jumladan odam homilasi rivojlanishining ilk bosqichlaridan biri.

    99 
    vakillarida ekpressiyalandimi yoki yo'q? Agar ekspressiyalangan bo'lsa, aynan biz rejalashtirgan 
    organ yoki to'qimada ekpressiyalandimi yoki yo'q? Tug'ilgan hayvonlar bizga zarur bo'lgan 
    mahsulotni bera oladimi? Agar bersa etarli darajadami? Ana shu savollarga javobni transgen 
    hayvon olishning so'nggi bosqichida izlanadi. Va yuqoridagi savollarga ijobiy javob topilsa, 
    transgen hayvonlar yaratish bo'yicha olib borilgan ishlar muvaffaqiyatli yakunlandi deb 
    hisoblash mumkin.
    Transgen hayvonlar yaratishning ikkinchi usuli: 

    embrional o'zak hujayralar yordamida transgen hayvonlar yaratish 
    Embrional o'zak hujayralar transgen hayvonlar yaratish mikroin'ektsiya usulidan 
    birmuncha farq qiladi. O'zak hujayralar hali retsipient organizmga kiritilmasdan avval begona 
    genni hujayra genomiga kirgan yoki kirmaganligini, agar kirgan bo'lsa, ekspressiyalanganmi 
    yoki yoq, kabi savollarga topish mumkin. Shuningdek hujayralar orasidan eng yahshilarini 
    tanlab olish imkoni bor. Bundan tashqari, hujayralarning bir qismini suyuq azotda muzlatib, 
    uzoq yillar davomida saqlasa bo'ladi.

    Download 4,16 Mb.
    1   ...   82   83   84   85   86   87   88   89   ...   134




    Download 4,16 Mb.
    Pdf ko'rish